<i id='6B4A02A9DA'><strike id='6B4A02A9DA'><tt id='6B4A02A9DA'><pre id='6B4A02A9DA'></pre></tt></strike></i> 
很可惜 T 。T 您现在还不是作者身份，不能自主发稿哦～
如有投稿需求，请把文章发送到邮箱service@hrtwrk.com，一经录用会有专人和您联系
咨询如何成为春羽作者请联系：悠游志小羽毛
黑豆因其种皮呈黑色而得名，转谷营养丰富，氨酰胺酶具有高蛋白、催化低热量的糖对黑豆蛋的影特性，其含有微量元素、基化维生素和大豆皂甙等多种功能因子，修饰响此外，白抗黑豆还具有美容、氧化防癌作用；壳寡糖是活性一种聚合度在2～20之间的寡糖，具有分子量低、转谷吸附效果好，氨酰胺酶水溶性好、催化易被人体吸收、糖对黑豆蛋的影生物活性高，基化调节肠道微生态、修饰响改善肠道组织形态和增强免疫功能等特点；蛋白质的糖基化修饰，是以共价键连接的方式将亲水性的糖类物质导入蛋白质分子之中，使其既有蛋白质的分子特性，又有糖类物质的亲水特性；研究表明，蛋白质糖基化修饰后表现出优越的乳化能力，其溶解性、胶凝性、流变学特性、抗氧化性、热稳定性、抗菌性等功能特性也有所提高。蛋白质糖基化修饰后抗氧化性的研究较少；本文利用糖基化修饰技术，以壳寡糖和黑豆蛋白为研究对象，制备壳寡糖糖基化黑豆蛋白，探讨其抗氧化性能的变化，为拓展糖基化蛋白改性和提供天然的抗氧化剂提供基本技术依据。
一、材料与方法
1、材料和试剂
黑豆，黑龙江地产青仁黑豆。DPPH(分析纯)，美国Sigam公司；ABTS(AR级)，美国Sigam公司；水溶性维生素E(Trolox)，美国Sigam公司；壳寡糖，浙江金壳药业有限公司；三氯化铁(FeCl3)(分析纯)，天津金汇太亚化学试剂有限公司；铁氰化钾(K3Fe(CN)4)(分析纯)，天津光复精细化工研究院；三氯乙酸(分析纯)，天津市大茂化学试剂厂，磷酸三钠(Na3PO4)(分析纯)，天津市长鑫宏翔商贸有限公司；钼酸铵(分析纯)，天津市科密欧化学试剂有限公司；亚硝酸钠(分析纯)，天津市鸿鑫化学试剂有限公司；对氨基苯磺酰胺(分析纯)，天津光复精细化工研究院；盐酸N-(1-萘基)-乙二胺(分析纯)，天津光复精细化工研究院。
2、试验仪器
DK-98-ⅡA电热恒温水浴锅购白天津市泰斯特仪器有限公司；紫外可见分光光度计购自瓦里安科技有限公司；XS204电子分析天平购自上海精学科学有限公司；漩涡混合器购自江苏同君仪器科技有限公司。
3、方法
（1）溶液配制
①DPPH工作液配置：精确称量0.0123gDPPH，乙醇充分溶解并定容至50mL，作为DPPH工作液(0.39mM)。
②PBS缓冲液：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HP04和0.24gKH2P04，溶于800mL蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH至7.4，最后加蒸馏水定容至lL即可。高压蒸汽灭菌20min，保存于室温或4℃冰箱中。
③ABTS工作液配置：精确称取0.192lgABTS标准品溶解于50mL蒸馏水中，制成7.0mol／L的ABTS水溶液。精确称取0.3312g过硫酸钾溶解于500mL蒸馏水中，制成2.45mmo/L过硫酸钾水溶液。将50mLABTS水溶液与50mL过硫酸钾水溶液混合，在室温下避光放置12h～16h，形成ABTS自由基储备液。准确吸取1.0mL加入40～50mL的无水乙醇，在734nm下吸光度为O.700±0.020得到ABTS工作液。
(2)黑豆蛋白的制备
①黑豆分离蛋白：黑豆蛋白分离提取的方法参照本研究前期试验中经过优化的提取方案：400g黑豆豆粕粉，加水4L，用0.5mol／LNaoH调pH至8.5，50℃水浴搅拌1.5h，8000r/min离心10min取上清液，用0.5mol／L盐酸调pH至4.5，8000r/min离心10min取下层固体，用pH为4.5的蒸馏水洗两遍，8000r/min离心10min，取沉淀，用0.5mol／LNaOH调pH至7.0，冷冻干燥(干燥条件：干燥架温度-20℃，真空度0.5mbar)
②酶法糖基化黑豆蛋白：酶法糖基化黑豆蛋白的方法参照本实验前期试验中优化所得方案：取1.5g黑豆分离蛋白，加1.5g壳寡糖，1.0g转谷氨酰胺酶和100mL蒸馏水，37℃水平振荡反应4h，80℃水浴灭酶5min，冷却至室温后4℃透析除去未结合的壳寡糖，冷冻干燥。
③自交联黑豆蛋白：为对比不同改性方法下黑豆蛋白的抗氧化性，转谷氨酰胺酶的加入比例同②，取1.5g黑豆分离蛋白，加1.0g转谷氨酰胺酶和100mL蒸馏水，37℃水平振荡反应4h，80℃水浴灭酶5min，冷却至室温后4℃透析除去未结合的壳寡糖，冷冻干燥。
④湿热法糖基化黑豆蛋白：为对比不同改性方法下黑豆蛋白的抗氧化性，壳寡糖的加入比例同②，取1.5g黑豆分离蛋白，加1.5g壳寡糖和100mL蒸馏水，90℃水浴4h，取出在25℃水浴5min，4℃透析除去未结合的壳寡糖，冷冻干燥。
(3)DPPH自由基清除能力测定
本试验中DPPH自由基清除能力测定在参考Sajga等的方法基础上，稍作改动。吸取1mL待测液，加入2mLDPPH工作液充分摇匀，在室温下避光30min，在517m处测定该液吸光度(Ai)，以无水乙醇作为空白，同时测定lmL试液与2mL无水乙醇的吸光度(Aj)及1mL无水乙醇和2mLDPPH工作液混合液的吸光度(Ac)，按下式计算DPPH的清除率(SA)。
（4）ABTS自由清除能力测定
参照唐艳平等的方法略作改动。吸取1.0mL待测液加入1.0mL的ABTS工作液，混匀。在室温下避光10min，于波长734nm下测其吸光度(Ai)，无水乙醇作为空白，同时测定30μL试液和1.0mL无水乙醇混合液吸光度(Aj)及30μL无水乙醇和1.0mL的ABTS工作液混合液吸光度(Ac)，按下式计算ABTS自由基清除率(SA)。
（5）总还原能力的测定
本试验中样品总还原能力的测定在Oyaizu等的方法基础上稍作调整。取测试样品溶液0.5mL加入pH为6.6的磷酸盐缓冲溶液和1％的K3Fe(CN)6溶液各2.5mL并混合均匀，于50℃放置20min，加入2.5mL蒸馏水和1.0mL0.1％的FeCl3混合均匀，静止10min后于700nm下测定吸光度(用0.5mL的蒸馏水替换0.5mL样品溶液其他条件不变作为调零溶液)。
（6）总抗氧化能力的测定
本试验中总抗氧化能力的测定参照Benzuie和Strain的方法，略做改进。使用磷钼络合物法，又称钼蓝法。总抗氧化能力测定原理：钼酸铵会在硫酸与磷酸的作用下发生还原反应，产物呈现绿色，该物质在695nm处有最大吸收波长。抗氧化剂会和钼会竞争发生还原反应，从而影响绿色产物的生成量。可以通过分光光度法通过测定吸光度来检测钼蓝的产量，以此间接的反映出抗氧化剂的能力。吸光度值越高表明抗氧化剂的抗氧化能力越强。在具塞试管中依次加入1.0mL(3mol／L)H2S04溶液，1.0mL(0.14mol／L)Na3P04溶液和1.0mL(0.2mol／L)钼酸铵溶液，再分别加入1.0mol以上样品溶液，蒸馏水定容至5.0mL摇匀，加塞于95℃水溶液中加热90min，取出冷却至室温后在695nm波长下测定吸光度。
（7）清除亚酸盐能力的测定
本试验中亚硝酸盐清除能力的测定根据李佳颖等的方法，略作修改。准确吸取0.5mL样品溶液于试管中，分别加入5μg，mL亚硝酸钠溶液250μL，振荡均匀，加pH3.0的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液2.0mL，混匀后于37℃水浴30min。加入1mL浓度为0.4％对氨基苯磺酰胺和1mL浓度为0.2％盐酸N-(1-萘基)-乙二胺，混匀并定容至刻度，静置15min，于545nm波长测定其吸光度Ao。同用无水乙醇代替样品其他条件不变，测得吸光值为氏；lmL浓度为0.2％盐酸N-(1-萘基)-乙二胺换为1.0mL无水乙醇测定吸光值为A2。按下式计算清除率(SA)。
声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系
相关链接：过硫酸钾，乙二胺，铁氰化钾，三氯化铁，三氯乙酸
本文为作者独立观点，不代表悠游志立场，未经允许不得转载。
我们致力于提供一个高质量内容的交流平台。为落实国家互联网信息办公室“依法管网、依法办网、依法上网”的要求，为完善跟帖评论自律管理，为了保护用户创造的内容、维护开放、真实、专业的平台氛围，我们团队将依据本公约中的条款对注册用户和发布在本平台的内容进行管理。平台鼓励用户创作、发布优质内容，同时也将采取必要措施管理违法、侵权或有其他不良影响的网络信息。
一、根据《网络信息内容生态治理规定》《中华人民共和国未成年人保护法》等法律法规，对以下违法、不良信息或存在危害的行为进行处理。
1. 违反法律法规的信息，主要表现为：
1)反对宪法所确定的基本原则；
2)危害国家安全，泄露国家秘密，颠覆国家政权，破坏国家统一，损害国家荣誉和利益；
3)侮辱、滥用英烈形象，歪曲、丑化、亵渎、否定英雄烈士事迹和精神，以侮辱、诽谤或者其他方式侵害英雄烈士的姓名、肖像、名誉、荣誉；
4)宣扬恐怖主义、极端主义或者煽动实施恐怖活动、极端主义活动；
5)煽动民族仇恨、民族歧视，破坏民族团结；
6)破坏国家宗教政策，宣扬邪教和封建迷信；
7)散布谣言，扰乱社会秩序，破坏社会稳定；
8)宣扬淫秽、色情、赌博、暴力、凶杀、恐怖或者教唆犯罪；
9)煽动非法集会、结社、游行、示威、聚众扰乱社会秩序；
10)侮辱或者诽谤他人，侵害他人名誉、隐私和其他合法权益；
11)通过网络以文字、图片、音视频等形式，对未成年人实施侮辱、诽谤、威胁或者恶意损害未成年人形象进行网络欺凌的；
12)危害未成年人身心健康的；
13)含有法律、行政法规禁止的其他内容；
2. 不友善：不尊重用户及其所贡献内容的信息或行为。主要表现为：
1)轻蔑：贬低、轻视他人及其劳动成果；
2)诽谤：捏造、散布虚假事实，损害他人名誉；
3)嘲讽：以比喻、夸张、侮辱性的手法对他人或其行为进行揭露或描述，以此来激怒他人；
4)挑衅：以不友好的方式激怒他人，意图使对方对自己的言论作出回应，蓄意制造事端；
5)羞辱：贬低他人的能力、行为、生理或身份特征，让对方难堪；
6)谩骂：以不文明的语言对他人进行负面评价；
7)歧视：煽动人群歧视、地域歧视等，针对他人的民族、种族、宗教、性取向、性别、年龄、地域、生理特征等身份或者归类的攻击；
8)威胁：许诺以不良的后果来迫使他人服从自己的意志；
3. 发布垃圾广告信息：以推广曝光为目的，发布影响用户体验、扰乱本网站秩序的内容，或进行相关行为。主要表现为：
1)多次发布包含售卖产品、提供服务、宣传推广内容的垃圾广告。包括但不限于以下几种形式：
2)单个帐号多次发布包含垃圾广告的内容；
3)多个广告帐号互相配合发布、传播包含垃圾广告的内容；
4)多次发布包含欺骗性外链的内容，如未注明的淘宝客链接、跳转网站等，诱骗用户点击链接
5)发布大量包含推广链接、产品、品牌等内容获取搜索引擎中的不正当曝光；
6)购买或出售帐号之间虚假地互动，发布干扰网站秩序的推广内容及相关交易。
7)发布包含欺骗性的恶意营销内容，如通过伪造经历、冒充他人等方式进行恶意营销；
8)使用特殊符号、图片等方式规避垃圾广告内容审核的广告内容。
4. 色情低俗信息，主要表现为：
1)包含自己或他人性经验的细节描述或露骨的感受描述；
2)涉及色情段子、两性笑话的低俗内容；
3)配图、头图中包含庸俗或挑逗性图片的内容；
4)带有性暗示、性挑逗等易使人产生性联想；
5)展现血腥、惊悚、残忍等致人身心不适；
6)炒作绯闻、丑闻、劣迹等；
7)宣扬低俗、庸俗、媚俗内容。
5. 不实信息，主要表现为：
1)可能存在事实性错误或者造谣等内容；
2)存在事实夸大、伪造虚假经历等误导他人的内容；
3)伪造身份、冒充他人，通过头像、用户名等个人信息暗示自己具有特定身份，或与特定机构或个人存在关联。
6. 传播封建迷信，主要表现为：
1)找人算命、测字、占卜、解梦、化解厄运、使用迷信方式治病；
2)求推荐算命看相大师；
3)针对具体风水等问题进行求助或咨询；
4)问自己或他人的八字、六爻、星盘、手相、面相、五行缺失，包括通过占卜方法问婚姻、前程、运势，东西宠物丢了能不能找回、取名改名等；
7. 文章标题党，主要表现为：
1)以各种夸张、猎奇、不合常理的表现手法等行为来诱导用户；
2)内容与标题之间存在严重不实或者原意扭曲；
3)使用夸张标题，内容与标题严重不符的。
8.「饭圈」乱象行为，主要表现为：
1)诱导未成年人应援集资、高额消费、投票打榜
2)粉丝互撕谩骂、拉踩引战、造谣攻击、人肉搜索、侵犯隐私
3)鼓动「饭圈」粉丝攀比炫富、奢靡享乐等行为
4)以号召粉丝、雇用网络水军、「养号」形式刷量控评等行为
5)通过「蹭热点」、制造话题等形式干扰舆论，影响传播秩序
9. 其他危害行为或内容，主要表现为：
1)可能引发未成年人模仿不安全行为和违反社会公德行为、诱导未成年人不良嗜好影响未成年人身心健康的；
2)不当评述自然灾害、重大事故等灾难的；
3)美化、粉饰侵略战争行为的；
4)法律、行政法规禁止，或可能对网络生态造成不良影响的其他内容。
二、违规处罚
本网站通过主动发现和接受用户举报两种方式收集违规行为信息。所有有意的降低内容质量、伤害平台氛围及欺凌未成年人或危害未成年人身心健康的行为都是不能容忍的。
当一个用户发布违规内容时，本网站将依据相关用户违规情节严重程度，对帐号进行禁言 1 天、7 天、15 天直至永久禁言或封停账号的处罚。当涉及欺凌未成年人、危害未成年人身心健康、通过作弊手段注册、使用帐号，或者滥用多个帐号发布违规内容时，本网站将加重处罚。
三、申诉
随着平台管理经验的不断丰富，本网站出于维护本网站氛围和秩序的目的，将不断完善本公约。
如果本网站用户对本网站基于本公约规定做出的处理有异议，可以通过「建议反馈」功能向本网站进行反馈。
(规则的最终解释权归属本网站所有)
Powered by © 2010-2022 悠游志 粤ICP备77645321号
评论 
